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畜牧人

標題: 抗菌肽知識系列大講堂（九） [打印本頁]

作者: 輕松由我 時間: 2010-4-28 17:26
標題: 抗菌肽知識系列大講堂（九）

抗菌肽的基因工程表達（一）

天然抗菌肽主要來自昆蟲，但其提取過程甚為復雜。一般需將蟲體研磨、離心，上清液再經(jīng)鹽析、葡聚糖凝膠層析等一系列步驟純化，才能去除其他雜蛋白，而產物濃度和回收率都不甚理想。用基因工程方法可以簡化上述步驟，且產量可獲明顯提高。

基因的構建及表達：目的基因的獲得可以從動物體中提取RNA，將其反轉錄擴增后得到cDNA，利用此方法已經(jīng)得到豬抗菌肽PR-39基因；或根據(jù)抗菌肽氨基酸殘基種類和其殺菌活性的相關性，替換某幾個氨基酸或將2種抗菌肽基因結合構造雜合肽。如將cecropin Bl5和17等位點的氨基酸替換后，其抗菌活性明顯提高；cecropin A N端1～7位和Milittin N端5～12位氨基酸雜合后，其產物具有熱穩(wěn)定性和高抑菌活性。

大腸桿菌表達系統(tǒng)基于大腸桿菌的原核表達系統(tǒng)是迄今在基因工程領域中應用最多、也最完善的系統(tǒng)，但運用該系統(tǒng)表達抗菌肽則遇到很多困難，主要表現(xiàn)在2個方面。一是抗菌肽的宿主細胞毒性。宿主細胞表達的抗菌肽會反饋性地抑制大腸桿菌等宿主細胞的增殖，從而影響抗菌肽的進一步表達；二是容易被降解。由于抗菌肽本身帶有大量正電荷，因而對蛋白酶非常敏感，在表達胞中容易被降解，難以實現(xiàn)大量表達。融合表達是解決上述問題的主要方法。xu等以pTRX為載體，在大腸桿菌BL21中以與硫氧還蛋白(TRX)融合的方式表達了38個氨基酸殘基的家蠅肽Mdmcec，目標蛋白用腸激酶切割下來，再用HPLC進行純化，最后獲得了11．2 mg／L的產量。但大腸桿菌表達產物均以包涵體的形式存在，需將細胞超聲破碎后透析純化，給后續(xù)處理帶來困難。

作者: liukai721026 時間: 2010-4-28 17:37
概念，炒作。

作者: sherier 時間: 2010-4-28 20:22
抗菌肽這東西好像一直居高和寡啊，還是老老實實用抗生素吧va

作者: SZNM 時間: 2010-4-28 22:36
還是不大成熟，微生態(tài)制劑多考慮一些吧

作者: 輕松由我 時間: 2010-4-29 17:14
抗菌肽的應用已經(jīng)較為廣泛，nisin已經(jīng)是國際公認的一種。另外還有很多國際公司研發(fā)抗菌肽，其療效相當好，例如拜耳公司等。抗菌肽的獨特性質和活性使其在應用中能夠替代抗生素發(fā)揮抗菌作用，并具有多種其他功效。詳見大講堂前幾期。
對于微生態(tài)制劑，確實是個很好的產品，但是微生態(tài)產品也只是衛(wèi)兵的作用，不能起到根本殺菌作用。
詳細請各位查閱相關資料。
下期將繼續(xù)講解抗菌肽的基因工程表達！謝謝關注~

作者: xuguangcai 時間: 2010-8-31 14:13
學習一下多謝樓主

作者: 學習 時間: 2010-9-1 11:38
沒有試驗數(shù)據(jù)嗎？

歡迎光臨畜牧人 (http://www.gzdxslyou.com/)